Big Endothelin-1 (1-39) (bovine)

一、基本信息英文全称Big Endothelin-1 (1-39) (bovine)中文全称牛源全长大内皮素 11–39 肽释义Big Endothelin-1 为成熟内皮素 ET-1 的无活性全长前体多肽bovine 代表牛源(1-39) 指完整 1~39 位氨基酸序列。三字母序列Cys-Ser-Cys-Ser-Ser-Leu-Met-Asp-Lys-Glu-Cys-Val-Tyr-Phe-Cys-His-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-Val-Asn-Thr-Pro-Glu-His-Leu-Val-Pro-Tyr-Gly-Leu-Gly-Ser-Pro-Ser-Arg-Ser单字母简写CSCSSLMDKECVYFCHLDIIWVNTP EHLVPTYGLGSP SRS氨基酸总数39 aa分子式C193H293N49O58S5分子量4388.05结构修饰说明线性全长前体肽无 N 端生物素、焦谷氨酸修饰无 C 端酰胺内皮素家族标志性双分子内二硫键Cys¹ ↔ Cys¹⁵Cys³ ↔ Cys¹¹两组二硫键形成 N 端双环刚性折叠是内皮素转化酶 ECE 高效识别底物的必要结构3.22–39 位羧基端区段为 ECE 酶切识别位点4.序列含 Met 残基存在氧化失活风险与人、猪 Big ET-1 存在个别氨基酸位点差异物种特异性明显。结构式三、理化性质1.紫外定量含 Trp、Tyr、Phe280 nm 紫外吸收强可紫外分光光度法定量2.稳定性要点4 个 Cys 构成双二硫环体系严禁 DTT、β- 巯基乙醇等还原剂还原会破坏双环多肽完全丧失底物活性含 Met极易氧化溶解、分装全程冰浴、减少敞口接触空气长期冻干粉需充氮气隔氧保存Trp、Tyr、Phe 均为强光敏芳香残基配制、储存全程避光无末端封闭修饰N、C 两端易被氨肽酶、羧肽酶、ECE 水解工作液现配现用3.电荷特性酸性残基Asp、Glu碱性残基Lys、His、Arg整体偏弱酸性适配 pH 6.0–7.4 PBS、牛血管内皮、肺动脉平滑肌、牛血浆缓冲体系4.溶解性Ser、Thr、Asn 大量亲水极性残基搭配带电氨基酸中性 PBS 常温可完全溶解5.空间构象1–15 位依靠双二硫键形成特征双环22–39 位柔性区为 ECE 结合与切割位点双环结构调控酶切催化效率。四、生物学背景牛 Big ET-1 (1-39) 是牛内皮素前体原剪切生成的全长前体自身无显著缩血管活性内皮素转化酶 ECE 在 21 位 Ile 与 22 位 Val 之间切断肽键释放成熟 ET-1ET-1 结合 ETₐ/ETᵦ受体介导强效血管收缩、平滑肌增殖。仅适配牛心血管、肺循环相关体外实验与人、猪源 Big ET-1 序列存在物种位点差异受体结合、酶切效率存在区别。五、生物学功能作为 ECE 天然全长底物体外酶切产生活性 ET-1诱导血管收缩、血管重构、肺动脉高压、肾脏损伤N 端双环结构维持多肽天然折叠保障 ECE 识别与催化效率参与牛心血管稳态、肺循环、肾脏微循环相关病理调控。六、科研应用牛原代肺动脉平滑肌、血管内皮细胞 ECE 酶活力检测、ECE 小分子抑制剂筛选Pull-down 实验探究 ECE 与牛源 Big ET-1 全长前体的蛋白相互作用牛高血压、肺动脉高压、血管纤维化体外细胞模型人 / 猪 / 牛 Big ET-1 全长前体、Big ET-2/ET-3 前体家族跨物种构效对比全长 Big ET-1 与截短体对照研究 N 端双环对 ECE 酶切活性的调控机制。七、溶解与储存规范溶解pH7.2 无菌 PBS 冰浴避光配制全程禁用还原剂缩短敞口时间防止 Met 氧化、二硫键断裂冻干粉短期 - 20 ℃避光密封长期分装充氮气隔氧-80 ℃避光储存工作液单次分装避免反复冻融2~8 ℃避光存放不超过 3 天酶活检测实验现配现用。