新手必看：AAV 肠道递送操作指南

肠道是机体重要的消化和代谢器官同时也是炎症性肠病IBD、克罗恩病CD、溃疡性结肠炎UC、肠道屏障功能以及肠-脑轴研究的重要对象。随着AAVAdeno-Associated Virus在体内基因递送领域的广泛应用越来越多研究者开始利用AAV进行肠道基因功能验证。然而相比肝脏、脑或眼等组织肠道结构复杂、细胞类型丰富因此很多研究者在实验设计时都会面临一个问题肠道研究中AAV应该选择哪种注射方式目前肠道靶向研究常见的递送方式包括尾静脉注射、腹腔注射、肠系膜上动脉SMA注射、灌肠以及结肠内注射。不同给药方式具有不同的适用场景。肠道AAV递送有哪些常见方式目前文献报道的肠道AAV递送方式主要包括尾静脉注射Tail Vein Injection腹腔注射Intraperitoneal Injection肠系膜上动脉注射Superior Mesenteric Artery InjectionSMA灌肠Enema结肠内注射Intracolonic Injection研究者可根据实验目的、感染区域以及操作条件选择合适的递送方案。尾静脉注射最常见的全身给药方式尾静脉注射是实验动物研究中最常见的AAV给药方式之一。其优势在于操作相对简单重复性较好适用于大多数实验室能实现全身性递送在肠道研究中尾静脉注射常与AAV9配合使用通过系统循环实现肠道组织感染。对于需要开展基因过表达、基因敲低以及疾病机制验证的研究尾静脉注射通常是优先考虑的方案之一。腹腔注射常用的体内递送方式腹腔注射同样是肠道研究中常见的给药方式。与尾静脉注射相比腹腔注射操作更加便捷对实验人员技术要求相对较低。在需要进行体内长期表达验证时腹腔注射也是常见选择。SMA注射直接靶向肠道的重要方法肠系膜上动脉SMA负责向小肠和部分结肠供血。因此通过SMA注射AAV可使病毒直接进入肠道供血系统提高肠道组织暴露水平。Steven Polyak等研究发现通过SMA注射不同血清型AAV后AAV9、AAV8以及AAVrh10均能够感染小肠和结肠组织其中AAV9应用最为广泛。对于需要获得较高肠道转导效率的研究SMA注射是一种重要选择。灌肠适用于结肠局部研究灌肠给药能够使病毒直接接触肠道腔面。对于聚焦结肠局部区域的研究灌肠具有一定优势。特别是在研究结肠炎、肠道屏障损伤等疾病模型时灌肠可作为局部递送方案进行选择。结肠内注射精准局部干预结肠内注射能够将AAV直接递送至目标区域。相比全身给药其局部靶向性更强。对于需要研究特定病变区域或局部基因功能的实验结肠内注射是一种有效策略。肠道研究如何选择合适的AAV注射方式不同研究目的对应不同递送策略研究需求推荐方式常规体内基因功能验证尾静脉注射操作便捷的体内递送腹腔注射提高肠道转导效率SMA注射结肠局部给药灌肠特定病灶区域干预结肠内注射如果研究目标是小肠或结肠广泛感染目前文献中应用最广泛的方案仍然是AAV9联合尾静脉注射或SMA注射。肠道研究为什么AAV9应用最广目前报道可用于肠道感染的血清型包括AAV9AAV8AAVrh10其中AAV9不仅能够有效感染小肠和结肠而且适配尾静脉注射、腹腔注射、SMA注射、灌肠以及结肠内注射等多种给药方式因此成为肠道研究中最常见的AAV血清型。肠道AAV解决方案针对肠道代谢、炎症性肠病、肠道屏障功能及肠-脑轴研究需求和元生物可提供AAV9、AAV8、AAVrh10等多种肠道相关AAV血清型包装服务并支持不同给药策略下的载体设计与构建。同时和元生物可提供Villin、MUC2、Lgr5等肠道细胞特异性启动子载体构建服务帮助研究人员实现精准、高效的肠道基因递送。