云克隆原创 | 兔角膜上皮细胞（CEC）原代细胞分离、培养和鉴定Protocol

兔角膜上皮细胞Primary Rabbit Corneal Epithelial Cells 的分离一、简介角膜是由角膜上皮层、前弹力层、基质层、后弹力层和内皮层组成角膜上皮层Epithelial cell是由非角化的鳞状上皮构成的共有5-7层细胞厚约50-70um是角膜的第一道屏障可以有效阻止水分的散失和外界病原体的入侵。角膜上皮层与机体其它部位的上皮结构不同在组织结构上由三种细胞组成有由外到内依次为鳞状上皮细胞翼状细胞和柱状细胞。柱状细胞是角膜上皮层中唯一具有分裂能力的细胞向上分化产生翼状细胞并最终分化产生鳞状上皮细胞向下分化产生基底膜使上皮层和前弹力层紧密结合。二、材料1、实验动物11周龄的SD大鼠20只雌雄不限2、组织来源眼球3、手术器材手术剪镊、解剖镊、眼科剪镊、手术刀、体式显微镜4、消化酶Dispase II分散酶、0.25%胰酶5、培养基KSFM三、实验步骤1. 麻醉处死大鼠。2. 用手术剪与手术镊取出大鼠眼睛。PBS冲洗数次至干净。3. 去除眼组织周边的筋膜和脂肪使用2%P/S浓度的PBS浸泡1-2小时后用手术刀沿角膜边缘环切下角膜。4. PBS清洗后加入0.1%的dispase II分散酶4℃过夜处理16-18h。5. 用移液枪轻轻吹吸角膜表面上皮细胞层待角膜表面组织脱落后移去角膜组织收集含有上皮细胞层的消化液800rpm离心5min。6. 弃上清加入0.25%的胰酶37℃消化10min。7. 用完全培养基终止消化移液器轻轻吹打1000rpm离心5min。8. 离心结束后去除上清用DMEM/F12完全培养基重悬制成细胞悬液接种。9. 3d后观察并换液处理。四、实验过程图片五、各阶段兔角膜上皮细胞图片兔角膜上皮细胞荧光鉴定武汉云克隆原创此protocol适用于犬,羊,猫等物种的角膜上皮细胞的分离。武汉云克隆实现了从取材、分离、冻存、质控到运输的全链条标准化管控。依托自有SPF级动物中心采用改良两步胶原酶灌流工艺温和分离细胞最大限度保护膜完整性与酶活性。每批次均经形态学鉴定、纯度检测、活性验证及功能筛查附带完整COA质检报告数据可溯源、可复现。产品支持现货直发同时提供定制化物种分离服务适配高校基础科研、CRO外包实验及药企合规申报等不同层级需求是国内肝研究领域兼具性价比与稳定性的原代细胞优选方案。